Viabilità, identità, sterilità e potenza delle cellule spiegate
Queste quattro parole appaiono su ogni certificato di analisi e quasi mai vengono spiegate ai pazienti. Ciascuna risponde a una domanda diversa: le cellule sono vive, sono le cellule giuste, il prodotto è pulito e le cellule funzionano ancora?
Viabilità — le cellule sono vive?
La viabilità è la percentuale di cellule intatte e viventi nella dose. Viene misurata tramite esclusione del colorante o citometria a flusso, e conta due volte: al rilascio, e di nuovo dopo lo scongelamento, poiché il congelamento e lo scongelamento uccidono alcune cellule. Una dose indicata come "100 milioni di cellule" significa poco senza il dato di viabilità e il tempo tra lo scongelamento e la somministrazione.
Identità — sono le cellule giuste?
L'identità conferma che il prodotto è una popolazione di cellule staminali mesenchimali e non qualcos'altro che è cresciuto in coltura. Il riferimento standard sono i criteri minimi ISCT: aderenza alla plastica, espressione di CD73, CD90 e CD105, assenza di marcatori ematopoietici come CD34, CD45 e HLA-DR, e dimostrata capacità di differenziazione trilineare. Chiedere quali marcatori sono stati misurati e a quale percentuale.
Sterilità, endotossina e micoplasma — è pulito?
La contaminazione è la modalità di fallimento con il legame più chiaro al danno per il paziente nei registri pubblicati delle cliniche non regolamentate, motivo per cui questi tre aspetti sono non negoziabili.
- Sterilità — test convalidati basati su coltura per la crescita batterica e fungina.
- Endotossina — misurata in unità di endotossina per chilogrammo; un prodotto può essere sterile e comunque causare una reazione febbrile se l'endotossina è elevata.
- Micoplasma — piccoli batteri che superano i filtri standard e non compaiono nei test di sterilità di routine; testati tramite PCR o coltura.
Potenza — funzionano ancora?
La potenza è un saggio funzionale: per le MSC, comunemente la capacità di sopprimere la proliferazione dei linfociti T attivati, o la secrezione misurata di un fattore rilevante come IDO o PGE2 dopo stimolazione. Le cellule che sono state espanse troppo a lungo possono superare i test di identità e viabilità pur perdendo funzionalità, quindi la potenza è ciò che distingue un prodotto controllato da un semplice conteggio cellulare.
Come si presenta una specifica
Un lotto non conforme significa che il trattamento viene posticipato. Un fornitore che non ha mai posticipato un trattamento per un rilascio fallito merita una seconda occhiata.
| Test | Formato tipico delle specifiche | Se fallisce |
|---|---|---|
| Viabilità | ≥ % definito al rilascio e post-scongelamento | Lotto rifiutato o dose ricalcolata |
| Identità | ≥ % definito positivo per CD73/CD90/CD105; ≤ % definito per CD34/CD45 | Lotto rifiutato |
| Sterilità | Nessuna crescita | Lotto distrutto |
| Endotossine | Sotto il limite EU/kg | Lotto distrutto |
| Micoplasma | Non rilevato | Lotto distrutto |
| Potenza | Risultato dell'analisi entro un intervallo definito | Lotto rifiutato |
Domande frequenti
Un numero di cellule più elevato è sempre migliore?
No. La dose viene scelta in base al protocollo e al chilogrammo di peso corporeo, se pertinente; oltre un certo punto, un maggior numero di cellule aggiunge costi e carico di infusione anziché benefici, e la vitalità e la potenza contano più del numero principale.
Che cos'è il numero di passaggio e perché è importante?
Il numero di passaggio conta quante volte le cellule sono state sottocolturate. Passaggi più elevati producono più cellule ma rischiano senescenza e perdita di potenza, motivo per cui i limiti di passaggio sono scritti nel processo.
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