Объяснение жизнеспособности, идентичности, стерильности и эффективности клеток
Эти четыре слова появляются в каждом сертификате анализа и почти никогда не объясняются пациентам. Каждое из них отвечает на свой вопрос: живы ли клетки, правильные ли это клетки, чист ли продукт и функционируют ли клетки?
Жизнеспособность — живы ли клетки?
Жизнеспособность — это процент интактных, живых клеток в дозе. Она измеряется методом исключения красителя или проточной цитометрии и имеет значение дважды: при выпуске и снова после размораживания, поскольку замораживание и размораживание убивают часть клеток. Доза, указанная как «100 миллионов клеток», мало что значит без показателя жизнеспособности и времени между размораживанием и введением.
Что на самом деле измеряют жизнеспособность, идентичность, стерильность и эффективность?
Жизнеспособность — это процент живых клеток при выпуске; идентичность подтверждает, что клетки несут ожидаемые мезенхимальные поверхностные маркеры; стерильность подтверждает отсутствие бактериального или грибкового роста; эффективность пытается измерить биологическую активность, обычно с помощью анализов иммуномодуляции. Первые три стандартизированы и рутинны. Анализы эффективности остаются наименее стандартизированной частью контроля качества клеточной терапии во всем мире.
Ключевые факты
- Жизнеспособность
- % живых клеток при выпуске
- Идентичность
- Иммунофенотип поверхностных маркеров
- Стерильность
- Отсутствие роста микроорганизмов в культуре
- Активность
- Функциональный анализ, еще не стандартизированный в отрасли
Что мы знаем
- Жизнеспособность, идентичность и стерильность имеют принятые методы и пороговые значения.
Что остается неясным
- Не существует общепринятого анализа активности для MSC, поэтому сравнения активности между лабораториями ненадежны.
Вопросы, проверенные медицинскими специалистами
Это резюме является общей медицинской информацией, а не медицинским советом и не обещанием пользы. Цифры являются цитируемыми диапазонами, подтвержденными в письменной форме после медицинского обзора.
Медицинский обзор осуществлен: Prof. Dr. Erdal Karaöz · Последнее обновление: · Editorial and evidence policy
Идентичность — правильные ли это клетки?
Идентичность подтверждает, что продукт представляет собой популяцию мезенхимальных стромальных клеток, а не что-то другое, выросшее в культуре. Стандартной ссылкой являются минимальные критерии ISCT: пластическая адгезия, экспрессия CD73, CD90 и CD105, отсутствие гемопоэтических маркеров, таких как CD34, CD45 и HLA-DR, и продемонстрированная способность к трехлинейной дифференцировке. Спросите, какие маркеры измерялись и в каком процентном соотношении.
Стерильность, эндотоксин и микоплазма — чист ли он?
Загрязнение является причиной отказа с наиболее четкой связью с вредом для пациента в опубликованных отчетах нерегулируемых клиник, поэтому эти три пункта не подлежат обсуждению.
- Стерильность — подтвержденное культуральное тестирование на рост бактерий и грибов.
- Эндотоксин — измеряется в эндотоксиновых единицах на килограмм; продукт может быть стерильным, но все равно вызывать лихорадочную реакцию, если уровень эндотоксина высок.
- Микоплазма — мелкие бактерии, которые проходят стандартные фильтры и не обнаруживаются при обычных тестах на стерильность; тестируются ПЦР или культуральным методом.
Эффективность — работают ли они по-прежнему?
Эффективность — это функциональный анализ: для MSCs обычно это способность подавлять пролиферацию активированных Т-клеток или измеряемая секреция соответствующего фактора, такого как IDO или PGE2, после стимуляции. Клетки, которые были слишком сильно экспандированы, могут пройти проверку идентичности и жизнеспособности, но потерять функцию, поэтому эффективность — это то, что отличает контролируемый продукт от простого подсчета клеток.
Как выглядит спецификация
Неудачная партия означает, что ваше лечение откладывается. Поставщик, который никогда не откладывал лечение из-за неудачного выпуска, заслуживает особого внимания.
| Тест | Типовой формат спецификации | В случае неудачи |
|---|---|---|
| Жизнеспособность | ≥ определенного % при выпуске и после оттаивания | Партия отклонена или доза пересчитана |
| Идентичность | ≥ определенного % положительных для CD73/CD90/CD105; ≤ определенного % для CD34/CD45 | Партия отклонена |
| Стерильность | Роста нет | Партия уничтожена |
| Эндотоксин | Ниже предельного значения EU/кг | Партия уничтожена |
| Микоплазма | Не обнаружена | Партия уничтожена |
| Эффективность | Результат анализа в пределах заданного диапазона | Партия отклонена |
Часто задаваемые вопросы
Всегда ли большее количество клеток лучше?
Нет. Доза выбирается в соответствии с протоколом и при необходимости на килограмм массы тела; после определенной точки, большее количество клеток увеличивает стоимость и инфузионную нагрузку, а не пользу, а жизнеспособность и эффективность важнее, чем число в заголовке.
Что такое число пассажей и почему оно важно?
Число пассажей указывает, сколько раз клетки были субкультивированы. Большее количество пассажей дает больше клеток, но сопряжено с риском старения и потери эффективности, поэтому в процесс закладываются ограничения по числу пассажей.
Читать далее
Сначала ознакомьтесь с вашими записями
Применимо ли что-либо из этого к вам, может быть решено только после того, как врач изучит ваши медицинские записи. Проверка бесплатна, и нет никаких обязательств по поездке.
Запросить бесплатную медицинскую консультацию